溶出と再生

クロマトグラフィー媒体がなくなったら、溶出する必要があります。基本原理は、より活性なイオンまたは基によってターゲット生成物を脱着することです。吸着剤が異なれば、その活性も異なります。したがって、タンパク質を溶出するには適切な溶離液を選択する必要があります。  クロマトグラフィー媒体 。

イオン交換クロマトグラフィーの溶出方法は大きく分けて 3 つあります。
1 つは同時溶出用です。溶離液としては、希酸、アルカリ、塩溶液などが使用でき、適当な有機溶媒も使用できますが、主に塩溶液が使用され、目的製品や最終製品の性質に応じて剤形が選択されます。選択されました。吸着される物質は単一種ではないことが多いため、それぞれの物質の電荷が異なり、媒体との結合力も異なります。同じ溶離液を使用しても、置換されやすい物質が先に媒体から流出し、結合力が強くなります。排出後は分別回収を行えば、さまざまな物質を分離して比較的純度の高い製品を得ることができます。この方法は、目的製品の性能がよくわかっている場合の分離や、分析種の分離によく使用されます。

2 番目は段階的な溶出、つまり異なる濃度の塩溶液による溶出です。分離媒体 交換吸着プロセスでは、さまざまなタンパク質が吸着されます。一定の溶出条件を使用すると、すべての成分を適切に分離できない場合があり、溶出条件を変更する必要があります。段階的に変化させることもできます。つまり、異なる溶離液または異なる pH 値の溶離液を段階的に使用して溶離し、異なる溶離液濃度や異なる酸性度に応じて異なる溶出ピークを得ることができます。つまり、ある塩濃度で目的タンパク質を得ることができ、異なる塩濃度で異なる目的タンパク質を得ることができる。この段階的な溶出方法は、既知の性質のタンパク質の分離、特に大規模生産に適しており、操作と制御が容易です。

3 番目のタイプは連続勾配溶出です。つまり、溶離液の分級プロセスにおいて、特定の線形変化に従って溶出液のイオン強度または pH を変化させます (通常、pH を変更する溶出方法を使用する特殊な場合のみ)。その過程で、異なるタンパク質が1つずつ置換されてさまざまなタンパク質成分が得られますが、同時にタンパク質は通常尾引きされません。グラジエント溶出は、イオン交換クロマトグラフィーで最も一般的に使用される溶出方法であり、最も強い溶出能力を持つ溶出方法であり、同様の電荷特性を持つ同様の成分の溶出に適しています。

溶出プロセスでは、並流溶出または向流溶出のいずれかを使用できます。並流溶出は順溶出とも呼ばれます。つまり、溶離液の流れ方向が作動流体の流れ方向と同じであり、向流溶出とも呼ばれます。逆溶離の場合、溶離液の流れ方向は反対です。作動流体の流れ方向に合わせて調整します。供給液が交換カラムを介して上から下に交換吸着されると、交換カラムの上層の吸着質の濃度が下層の吸着質の濃度よりも高くなり、交換カラムからの溶出液の逆脱離が起こります。下から上に移動させると、より効率的に溶出の目的を達成できます。ただし、逆溶出操作は順溶出よりもはるかに複雑であるため、主に正の溶出に基づいています。

溶離液の流量もイオン交換クロマトグラフィーの分離に影響し、溶出速度は通常一定に保たれます。一般に、遅い溶出の分解能は速い溶出の分解能よりも優れていますが、溶出速度が遅すぎると、分離時間が長くなり、サンプルの拡散、スペクトルピークの広がり、分解能の低下などの副作用が発生するため、状況に応じて異なります。実際の状況について。適切な溶出速度を選択してください。溶出ピークが特定の領域に比較的集中して重複する場合は、グラジエント範囲を適切に小さくするか、溶出速度を遅くして分解能を高める必要があります。分離能は良いが、溶出ピークの幅が広すぎる場合は、溶出速度を適切に上げる必要があります。