ニ・セライフ ®6FF (NTA) ニッケルキレートアガロースクロマトグラフィー樹脂
ニッケルキレートアガロースクロマトグラフィー樹脂
Ni Seplife 6FF (NTA)
ニ・セライフ ® 6FF (NTA) ニッケルキレートアガロースクロマトグラフィー樹脂製品プロファイル:
Niキレートアガロースクロマトグラフィー (NTA) は 6FF アガロース培地でイミノ二酢酸を結合させ、Ni2+ イオンをキレート化して アフィニティークロマトグラフィー媒体 。に広く使用されています。 タンパク質の加工 、 核酸 そして ポリペプチドの精製 の下流で バイオファーミングとバイオエンジニアリング 。
ニ・セライフ ® 6FF (NTA) ニッケルキレートアガロースクロマトグラフィー樹脂 樹脂パラメーター:
| レジンコード | ニ・セライフ ® 6FF (NTA) |
| 外観 | スフィアジェルビーズ |
| 粒径(脦录m) | 45×165 |
| マトリックス | セライフ6FF |
| 流量(cm/h) | 370ポンド |
| 圧力(MPa) | 0.3 |
| イオン結合能 | （Ni2+ μmol/ml ）: ~15 |
| pH安定性 | 3～13（長期）、2～14（短期、CIP） |
| 応用 | Hisタグタンパク質の精製 |
| 化学的安定性 | 水緩衝液、0.1M NaOH 中で安定。0.01M HCl; 8M 尿素 |
ニ・セライフ
® 6FF (NTA) ニッケルキレートアガロースクロマトグラフィー樹脂のテスト手順:
1.カラム充填
すべての材料と試薬を室温にし、初期緩衝液と溶出液を調製します。
2.平衡
導電率、pH、およびその他のパラメータが変化しないまで、ベッドボリュームの 2 ～ 5 の初期緩衝液でバランスをとります。
3.サンプルのロード
(1) サンプルは通常、pH 6 ～ 8 の初期バッファーに溶解しますが、ローディングバッファーの pH を上げるとローディングが増加する可能性があります。
(2) バッファーには EDTA やクエン酸塩が含まれていてはならず、メルカプトエタノールや DTT などの還元剤も避けることが最善です。
(3)一般的に使用される緩衝液は、10～100mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、20～200mmol/LTris-HCl緩衝液です。
(4) イオン交換を除去するために、通常、0.15 ～ 0.5 mol/L の NaCl がバッファーに添加されます。
(5)ニッケルキレートアガロースゲルを初めて使用する場合は、初期バッファーとして 50 mmol/L PBS (50 mmol/L NaH2PO4、0.5 mol/L NaCl、pH 7.4) を使用することをお勧めします。
4.溶出
溶出は一般に次の方法に分けられます。
(1) 溶出 pH を下げる: ほとんどのタンパク質は pH 6 ～ 4 (pH 3 ～ 4 でも) で溶出され、緩衝液には酢酸ナトリウム、クエン酸、およびリン酸緩衝液系が使用されます。
（２）競合溶出：金属イオンに対する親和性を有する競合物質の濃度を直線的に増加または増加させる（例えば、０〜０．５ｍｏｌ／Ｌのイミダゾール、０〜５０ｍｍｏｌ／Ｌのヒスチジン、０〜２ｍｏｌ／ＬのＮＨ ４ Ｃｌ）。
(3)キレート剤の溶出:EDTAやEGTAなどのキレート剤は金属イオンと反応してタンパク質を溶出させることができます。しかし、この方法では異なるタンパク質を分離することができず、タンパク質の吸着に影響を及ぼし、融合タンパク質を吊るすことができなくなります。
備考：
(1)初めて使用する場合、溶出に必要なイミダゾール濃度が不明な場合は、10mmol/L、20mmol/L、50mmol/L、100mmol/L、200mmol/L、500mmol/Lを追加することを推奨します。初期バッファ。イミダゾールを低濃度から高濃度までそれぞれ溶出および回収し、溶出結果をSDS-PAGE電気泳動により確認した。
(2)イミダゾールはアルカリ性なので、対応する緩衝液を調製した後、HClでpHを調整します。
(3)溶出pHを下げてキレート剤を溶出させると金属イオンが脱落してしまい、次回使用するまでに金属イオンを再キレートする必要があります。
(4) 条件に応じて、イミダゾール勾配直線溶出を実行して、好ましい溶出条件を決定することができます。
上記の溶出方法では、イオン交換を排除するために 150 ～ 500 mmol/L の NaCl をバッファーに添加する必要があります。
5.再生
(1) 繰り返し使用した後、またはキレート化金属イオンを交換する必要がある場合には、ゲルをデニックして再生する必要があります。ニッケル除去方法: 最初にカラムをベッドボリュームの 5 ～ 10 の蒸留水ですすぎ、次にカラムをベッドボリュームの 5 ～ 10 の 100 mmol/L EDTA ですすぎ、最後にベッドボリュームの 2 ～ 3 の 0.5 mol/L NaCl 洗浄液を使用します。残留EDTAを除去します。
(2)複数回使用したカラムは通常、ニッケル除去後に洗浄が必要です。洗浄方法: 0.1~1.0 mol/L NaOH でカラムを反転し、50 cm/h で 1~2 時間維持します。強力な不純物を除去できるだけでなく、熱源も除去できます。
(3)洗浄後に金属イオンを再キレート化します。キレート化法: まず、ニッケル除去後のカラムを 2 ～ 5 ベッドボリュームの蒸留水で完全に平衡化し、次に 0.1 ～ 0.3 mol/L の金属塩溶液を使用して 5 ～ 10 ベッドボリュームを通過させて金属イオンをキレートします。ベッドボリュームの 5 ～ 10 倍の蒸留水ですすぎ、キレート化されていない金属イオンを除去します。
6.CIP
(1) イオン交換による吸着タンパク質の除去: ベッドボリュームの 2 ～ 3 を 2 mol/L NaCl 溶液で洗い流しました。
(2) 疎水性の強いタンパク質や脂質などの除去: ベッド容量の 4 倍を 70% エタノールまたは 30% イソプロパノールで洗い流しました。
(3)沈殿タンパク質、疎水性タンパク質の除去：リファレンスゲル再生工程。
7.保管
密封して 4 ～ 30℃ (保存溶液中 20% エタノール)、乾燥、換気、清潔、凍結しないで保存します。使用したカラムは 4 ～ 8℃、20% エタノール溶液で保存します。
注意：
(1)サンプルとNiの分離
®6FF (NTA) は溶出バッファーで平衡化してからクロマトグラフィーカラムに移す必要があります。
(2) カラムベッドは平らで、溝や気泡がなくなければなりません。そうでない場合は、再度取り付ける必要があります。
(3)使用時はカラムとバッファーの温度が同じであることを確認し、カラムベッド内で気泡が発生して精製効果に影響を与えないように注意してください。
(4) 溶出プロセス中の流速は厳密に制御する必要があり、速すぎないようにする必要があります。
(5)ローディングおよび溶出プロセス全体の間、シリンダー表面の乾燥が防止されます。
