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NiSeplife®6FF(NTA)

タンパク質、核酸、ポリペプチドの精製の処理
製品説明

ニッケルキレートアガロースクロマトグラフィー樹脂

Ni Seplife 6FF(NTA)

製品プロファイル:
Niキレートアガロースクロマトグラフィー(NTA)は、6FFアガロース培地にイミノ二酢酸を結合し、Ni2 +のイオンをキレート化してアフィニティークロマトグラフィー媒体。それは広く使用されていますタンパク質の処理,核酸そしてポリペプチド精製の下流でバイオファーミングとバイオエンジニアリング.

20200804083655

樹脂パラメータ:

樹脂コード NiSeplife®6FF(NTA)
外観 スフィアゲルビーズ
粒度(μm) 45〜165
マトリックス Seplife 6FF
流量(cm / h) ≥370
圧力(MPa) 0.3
イオン結合能 (Ni2 + umol / ml):〜15
pHの安定性 3〜13(長期)、2〜14(短期、CIP)
応用 Hisタグタンパク質の精製
化学的安定性 水緩衝液、0.1MNaOHで安定。 0.01M HCl; 8M 尿素


テスト手順:
1.カラムパッキング
すべての材料と試薬は室温で、初期バッファーと溶出液を準備します。
2.均衡
導電率、pH、その他のパラメーターが変わらなくなるまで、2〜5ベッドボリュームの初期緩衝液とバランスを取ります。
3.サンプルの読み込み
(1)サンプルは一般的にpH 6〜8の初期緩衝液に溶解し、ローディングバッファーのpHを上げるとローディングを増やすことができます。
(2)バッファーにはEDTAやクエン酸塩が含まれていてはならず、メルカプトエタノールやDTTなどの還元剤は避けるのが最善です。
(3)一般的に使用される緩衝液は、10〜100mmol / Lリン酸ナトリウム緩衝液、20〜200mmol / LTris-HCl緩衝液です。
(4)イオン交換を排除するために、通常、0.15〜0.5 mol / LのNaClがバッファーに添加されます。
(5)ニッケルキレートアガロースゲルを初めて使用する場合は、初期バッファーとして50 mmol / L PBS(50 mmol / L NaH2PO4、0.5 mol / L NaCl、pH 7.4)を使用することをお勧めします。
4.溶出
溶出は一般的に次の方法に分けられます。
(1)pH溶出の低減:ほとんどのタンパク質はpH 6〜4(pH 3〜4でも)で溶出され、バッファーは酢酸ナトリウム、クエン酸、リン酸バッファーシステムの場合があります。
(2)競合溶出:金属イオンに親和性のある競合物質の濃度を直線的に増加または増加させます(例:0-0.5 mol / Lイミダゾール、0-50 mmol / Lヒスチジン、0-2 mol / L NH4Cl)。
(3)キレート剤の溶出:EDTAやEGTAなどのキレート剤は金属イオンと反応してタンパク質を溶出させることができます。ただし、この方法では異なるタンパク質を分離できず、タンパク質の吸着に影響を与えるため、融合タンパク質を吊るすことができません。
備考:
(1)初めて使用する場合、溶出に必要なイミダゾールの濃度が不明な場合は、10mmol / L、20mmol / L、50mmol / L、100mmol / L、200mmol / L、500mmol / Lを加えることをお勧めします。初期バッファー。イミダゾールを溶出し、低から高にそれぞれ収集し、溶出した結果をSDS-PAGE電気泳動で同定しました。
(2)イミダゾールはアルカリ性であり、対応する緩衝液を調製した後、pHをHClで調整します。
(3)pHを下げてキレート剤を溶出すると、金属イオンが脱落するため、次回使用する前に金属イオンを再キレート化する必要があります。
(4)条件付きで、イミダゾールグラジエント線形溶出を実行して、好ましい溶出条件を決定することができます。
上記の溶出方法では、イオン交換を排除するために、150〜500 mmol / LのNaClをバッファーに添加する必要があります。
5.再生
(1)繰り返し使用した後、またはキレート化された金属イオンを交換する必要がある場合は、ゲルのニックを外して再生する必要があります。ニッケル除去法:最初に5〜10ベッドボリュームの蒸留水でカラムをリンスし、次に5〜10ベッドボリュームの100 mmol / L EDTAでカラムをリンスし、最後に2〜3ベッドボリュームの0.5 mol / LNaCl洗浄液を使用します。残留EDTAを取り除きます。
(2)複数回使用するカラムは、通常、ニッケル除去後に洗浄する必要があります。洗浄方法:カラムを0.1〜1.0 mol / L NaOHで逆さにし、50 cm / hで1〜2時間保持します。これにより、強い不純物を除去できるだけでなく、熱源も除去できます。
(3)洗浄後の金属イオンの再キレート化。キレート法:まず、ニッケル除去後のカラムを2〜5ベッドボリュームの蒸留水で完全に平衡化し、次に0.1〜0.3 mol / Lの金属塩溶液を使用して5〜10ベッドボリュームを通過させて金属イオンをキレート化します。キレート化されていない金属イオンを除去するために、5〜10ベッドボリュームの蒸留水ですすいでください。
6.CIP
(1)イオン交換により吸着したタンパク質の除去:2〜3ベッドボリュームを2 mol / LNaCl溶液で洗い流しました。
(2)強力な疎水性タンパク質や脂質などの除去:4ベッドボリュームを70%エタノールまたは30%イソプロパノールで洗い流しました。
(3)沈殿したタンパク質、疎水性タンパク質の除去:参照ゲル再生ステップ。
7.ストレージ
密封して4〜30°C(保存液中の20%エタノール)で保存し、乾燥、換気、清潔、冷凍なし。使用済みカラムは4〜8℃の20%エタノール溶液で保存します。


注意:
(1)サンプルとNiseplife®6FF(NTA)を溶出バッファーで平衡化してから、クロマトグラフィーカラムに移す必要があります。
(2)カラムベッドは平らで、溝や気泡がない必要があります。そうでない場合は、再度取り付ける必要があります。
(3)使用する場合は、カラムとバッファーの温度が同じであることを確認し、カラムベッドでの気泡の発生や精製効果への影響を回避してください。
(4)流速は、溶出プロセス中に厳密に制御する必要があり、速すぎないようにする必要があります。
(5)ローディングおよび溶出プロセス全体で、シリンダー表面の乾燥を防ぎます。

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