ニッケルキレートアガロースクロマトグラフィー樹脂
ni seplife 6ff（IDA）指示
Niキレートアガロースクロマトグラフィー （IDA）は、6FFアガロース培地でイミノディケティック酸を結合し、次にNi2+のイオンをキレート化します としてとして アフィニティクロマトグラフィックメディア。それは広く使用されています タンパク質の処理, 核酸 と ポリペプチド精製 のダウンストリームで バイオファルミングとバイオエンジニアリング.
| 樹脂コード | NiSeplife®6ff（IDA） |
| 外観 | 球体ゲルビーズ |
| 粒子サイズ（μm） | 45 ～165 |
| マトリックス | Seplife 6ff |
| 流量（cm/h） | ≥370 |
| 圧力（MPA） | 0.3 |
| イオン結合能力 | （ni2+ umol/ml）：〜15 |
| 参照線形流量 | 60cm/h |
| pH安定性 | 3〜13（長期）、2〜14（短期、CIP） |
| 応用 | HISタグタンパク質精製 |
| 化学的安定性 | 水緩衝液中の安定、0.1mol/l naoh; 0.01mol/l hcl; 8 mol/Lカルバミド |
1.カラムパッキング
（1）室温でのすべての材料と試薬、初期緩衝液と溶出の準備。
（2）カラムサイズごとに樹脂サンプルを服用し、20％エタノールを洗い流して乾燥させ、緩衝液（樹脂の比率：バッファー= 3：1）を使用してホモジネートおよび脱ガス処理を行います。
（3）水または緩衝液を使用して、柱の内側または底部を濡らしたままにします。水または緩衝液のレベルは、フィルターマンブレーンよりも高く、柱の底部をボブルなしで確認する必要があります。
（4）ガラス棒を使用して、バブルを避けるために、1回の内部表面とともにホモジネートをカラムに誘導します。開いた列アウトレットバルブを開いて、樹脂を自由に設定し、列のトップキャップをよく接続します。
（5）per動ポンプを開いて、バッファーを使用してバッファーの流量を使用して1.33倍の流量で柱を通過させます。 2-3BVバッファーを使用して、列バランスを取ります。
2.平衡
導電率、pH、およびその他のパラメーターが変更されないまで、2〜5ベッドボリュームの初期バッファー溶液とバランスを取ります。
3.サンプルの読み込み
（1）サンプルは通常、pH 6-8の初期バッファーに溶解し、負荷バッファーのpHを増やすと負荷が増加する可能性があります。
（2）緩衝液にはEDTAとクエン酸塩が含まれてはならず、MercaptoethanolやDTTなどの減少剤を避けることをお勧めします。
（3）一般的に使用されるバッファー溶液には、10〜100 mmol/Lのリン酸ナトリウムバッファー溶液、20〜200 mmol/LTRIS-HCLバッファー溶液があります。
（4）NaClの0.15〜0.5 mol/Lがバッファーに追加され、イオン交換が除去されます。
（5）ニッケルキレートアガロースゲルを初めて使用する場合、50 mmol/L PBS（50 mmol/L Nah2Po4、0.5 mol/L NaCl、pH 7.4）を初期バッファーとして使用することをお勧めします。
4.解決
溶出は通常、次の方法に分かれています。
（1）pH溶出を減らす：ほとんどのタンパク質はpH 6-4で溶出され（pH 3-4）、緩衝液は酢酸ナトリウム、クエン酸、リン酸緩衝液システムである場合があります。
（2）競合溶出：金属イオンに親和性を備えた競合する物質の濃度を直線的に増加または増加させる（例：0-0.5 mol/Lイミダゾール、0-50 mmol/Lヒスジン、0-2 mol/L NH4Cl）。
（3）キレート剤溶出：EDTAやEGTAなどのキレート剤は金属イオンと反応してタンパク質を溶出させることができます。ただし、この方法は異なるタンパク質を分離することはできず、タンパク質の吸着に影響を与えるため、融合タンパク質がハングすることができません。
（1）初めて使用する場合、溶出に必要なイミダゾールの濃度が不確かな場合は、10mmol/L、20mmol/L、50mmol/L、100mmol/L、200mmol/L、500mmol/Lを追加することをお勧めします。初期バッファ。イミダゾールはそれぞれ溶出し、それぞれ低から高へ収集され、溶出された結果はSDS-PAGE電気泳動によって特定されました。
（2）イミダゾールはアルカリ性であり、対応する緩衝液が準備された後、pHはHClで調整されます。
（3）pH溶出を下げてキレート剤を溶出させると、金属イオンが落ち、次の使用前に金属イオンを再キレーションする必要があります。
（4）条件付きでは、イミダゾール勾配の線形溶出を実行して、好みの溶出条件を決定できます。
上記の溶出方法では、150〜500 mmol/LのNaClをバッファーに加えて、イオン交換を排除する必要があります。
5.再生
（1）ゲルは、繰り返し使用した後、またはキレート化された金属イオンを交換する必要がある場合に、デニックおよび再生される必要があります。ニッケル除去方法：まず、5〜10床の蒸留水でカラムをすすぎ、次にカラムを5〜10容量の100 mmol/ L EDTAですすぎ、最終的に0.5 mol/ l NaCl洗浄の2〜3床のボリュームを使用します離れた残留EDTA。
（2）通常、複数回使用される列は、ニッケル除去後にクリーニングする必要があります。洗浄方法：0.1〜1.0 mol/L NaOHでカラムを逆にし、1〜2時間、50 cm/hに保ち、強い不純物を除去するだけでなく、熱源を除去します。
（3）洗浄後の金属イオンの再コーティング。キレート化方法：第一に、ニッケル除去後のカラムは、2〜5床の蒸留水で完全に平衡化され、次に0.1〜0.3 mol/Lの金属塩溶液を使用して、5〜10床を通過して金属イオンをキレートします。 5〜10床の蒸留水ですすぎ、未調整の金属イオンを除去します。
6.CIP
（1）イオン交換によって吸着されたタンパク質の除去：2〜3床を2 mol/L NaCl溶液で洗浄しました。
（2）強力な疎水性タンパク質や脂質などの除去：4床を70％エタノールまたは30％イソプロパノールで洗浄しました。
（3）沈殿タンパク質の除去、疎水性タンパク質：参照ゲル再生ステップ。
7.ストレージ
密閉され、4〜30°C（貯蔵溶液中の20％エタノール）、乾燥、換気、清潔、凍結されていない。使用済みのカラムは、4〜8°C、20％エタノール溶液に保存されます。
注意：
（1）サンプルとniseplife®6ff（ida）は 溶出バッファーで平衡化されています 次に、Chromatographyカラムに移動します。
（2）コラムベッドは平らで、溝や気泡がないため、再インストールする必要があります。
（3）使用する場合、柱とバッファーの温度が同じであることを確認し、柱ベッドでの泡の生成を回避し、精製効果に影響を与えます。
（4）流量は、溶出プロセス中に厳密に制御され、速すぎないようにする必要があります。
（5）荷重と溶出プロセス全体で、シリンダー表面が乾燥するのを防ぎます。
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